是将带有接头序列的双链DNA(Double-stranded DNA,dSDNA)，
通过高温变性形成单链DNA(Single-stranded DNA,SSDNA)，环化引物与SSDNA的两端互补配对，
在连接酶的催化下SSDNA的首尾相连接，
形成单链环状DNA(Single-strand circular DNA,sscirDNA)。

以单链环状DNA为模板，在DNA聚合酶作用下进行滚环扩增(Rolling Circle Amplification,RCA)将单链环状DNA扩增到100-1000拷贝，扩增产物称为DNB。
DNB通过简单的质量浓度质控后，就可以用于下一步的上机测序，操作简单，且不需要昂贵的定量设备和耗材。
基于RCA的线性扩增技术，每次扩增都是以原始的DNA单链环为模板，
使用保真性极高的聚合酶，使得在DNB的所有拷贝的同一个位置上出同样的错的几率几乎是零。
RCA扩增技术有效的避免了PCR扩增错误指数积累的问题，从而大大提高测序的准确性。